DAPT对骨肉瘤U2OS细胞增殖和凋亡影响的实验研究

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摘要目的观察γ-分泌酶抑制剂DAPT对人骨肉瘤细胞系U2OS增殖和凋亡的影响，探讨DAPT抑制骨肉瘤增殖并诱导其凋亡的可能机制。方法采用体外培养人成骨肉瘤细胞系U2OS，CCK-8法检测不同浓度DAPT对成骨肉瘤细胞系U2OS生长的抑制作用；Annexin V-FITC/PI双标染色，流式细胞仪检测细胞凋亡率；Hoechst 33258染色，倒置荧光显微镜下观察细胞凋亡的形态学变化；应用RT-PCR和Western blot法检测DAPT对凋亡通路相关mRNA和蛋白表达的影响；采用Caspase活性检测试剂盒检测Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活性变化。结果 CCK-8检测显示5～50 μmol/L的DAPT可抑制人骨肉瘤U2OS细胞增殖并具有时间和剂量依赖性；流式细胞术检测显示5、10、20 μmol/L的DAPT可明显诱导骨肉瘤U2OS细胞发生凋亡，与对照组相比差异有统计学意义（P < 0.05）；5、10、20 μmol/L的DAPT处理后，Hoechst 33258染色可见凋亡小体；RT-PCR和Western blot分析显示，经DAPT（5、10、30 μmol/L）处理后的骨肉瘤细胞系U2OS表达Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9 mRNA较对照组明显增高（P < 0.05），促凋亡蛋白Bax表达增加（P < 0.05），抑制凋亡蛋白Bcl-2表达减少（P < 0.05）；Caspase活性检测显示，DAPT（5、10、20、30 μmol/L）处理后，Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9活性较对照组明显升高（P < 0.05）。结论 γ-分泌酶抑制剂DAPT对骨肉瘤细胞系U2OS的增殖有显著抑制作用，并可诱导其发生凋亡，其作用机制可能与激活Caspase依赖的凋亡途径有关。

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	胡国海代国刘盖为宋奇余铃杨俭郭卫春

关键词 ： &gamma, -分泌酶抑制剂, DAPT, 骨肉瘤, 增殖, 凋亡

Abstract：Objective To observe the effect of gamma secretase inhibitor DAPT on proliferation and apoptosis of human osteosarcoma cell line U2OS, and to explore the possible mechanism of DAPT inhibiting osteosarcoma proliferation and inducing apoptosis. Methods Osteosarcoma cell line U2OS was cultured in vitro. Cell proliferation was tested by cell counting kit-8 (CCK-8) assay. Double stained by Annexin V-FITC and Propidium Iodide (PI), the cells were detected by flow cytometry (FCM) for apoptosis. Hoechst 33258 was used to detect the morphological change of typical apoptotic cells. The apoptosis related mRNA and protein levels in U2OS were detected by RT-qPCR and Western blot. The activities of Caspase-3, Caspase-8 and Caspase-9 were measured with Caspase activity assay kit. Results CCK-8 assay showed that 5-50 μmol/L DAPT inhibited the proliferation of human osteosarcoma U2OS cells and in a time- and dose-dependent manners. Flow cytometry showed that 5, 10 and 20 μmol/L DAPT could significantly induce apoptosis of osteosarcoma U2OS cells, compared to the control group, the differences were statistically significant (P < 0.05). Apoptotic body could be observed by Hoechst 33258 staining after treatment with 5, 10 and 20 μmol/L DAPT. RT-PCR and Western blot analysis showed that after treatment with DAPT (5, 10, 30 μmol/L), the expression of Caspase-3, 8 ,9 mRNA were higher than those of control group (P < 0.05), the pro-apoptotic protein Bax increased (P < 0.05), and anti-apoptosis protein Bcl-2 protein decreased (P < 0.05). The activities of Caspase-3, Caspase-8 and Caspase-9 promoted obviously after treatment with DAPT (5, 10, 20, 30 μmol/L) when compared with the control group (P < 0.05). Conclusion DAPT can significantly inhibit the proliferation and induce apoptosis of human osteosarcoma cell line U2OS. Its mechanism of action may be related to activation of Caspase dependent apoptosis pathway.

Key words： γ-secretase inhibitor DAPT Osteosarcoma Proliferation Apoptosis

基金资助:国家自然科学基金资助项目（81341078）；
中央高校基本科研业务费专项基金项目（2042017kf0163）。

通讯作者: 郭卫春（1971-），主任医师，教授，博士生导师；研究方向：脊柱外科与骨肿瘤。

作者简介: 胡国海（1975-），武汉大学人民医院2015级生物医学工程专业在读硕士研究生；研究方向：脊柱外科与骨肿瘤。

引用本文:

胡国海代国刘盖为宋奇余铃杨俭郭卫春. DAPT对骨肉瘤U2OS细胞增殖和凋亡影响的实验研究[J]. 中国医药导报, 2017, 14(28): 4-8,12.
HU Guohai DAI Guo LIU Gaiwei SONG Qi YU Ling YANG Jian GUO Weichun. The effects of γ-secretase inhibitor DAPT on proliferation and apoptosis of U2OS. 中国医药导报, 2017, 14(28): 4-8,12.

链接本文:

http://www.yiyaodaobao.com.cn/CN/ 或 http://www.yiyaodaobao.com.cn/CN/Y2017/V14/I28/4

[1] Allison DC，Carney SC，Ahlmann ER，et al. A Meta-analysis of osteosarcoma outcomes in the modern medical era [J]. Sarcoma，2012，2012：704872.
[2] 郭征.我国骨肉瘤治疗的现状与问题及发展方向[J].中国骨与关节杂志，2015，4（5）：338-342.
[3] Vijayamurugan N，Bakhshi S. Review of management issues in relapsed osteosarcoma [J]. Exp Rev Anticancer Ther，2014，14（2）：151-161.
[4] Luetke A，Meyers PA，Lewis I，et al. Osteosarcoma treatment-where do we stand a state of the art review [J]. Cancer Treatment Rev，2014，40（4）：523-532.
[5] Tao J，Jiang M，Jiang L，et al. Notch activation as a driver of osteogenic sarcoma [J]. Cancer Cell，2014，26（3）：390-401.
[6] 赵海恩，赵新文.骨肉瘤转移的相关分子及临床应用研究进展[J].中国矫形外科杂志，2014，22（5）：434-440.
[7] Mcmanus MM，Weiss KR，Hughes DPM. Understanding the role of Notch in osteosarcoma [M]// Current advances in osteosarcoma. Springer International Publishing，2014：67-92.
[8] 卢余莉，谢程.γ分泌酶抑制剂阻断Notch信号通路对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响[J].四川大学学报：医学版，2014，45（4）：578-581.
[9] 魏敏，陆晓媛，缪璐.γ-分泌酶抑制剂DAPT对人宫颈癌Hela细胞体外增殖的影响[J].辽宁医学院学报，2010，31（5）：390-392.
[10] 胡敏，李少林，袁犁，等.γ分泌酶抑制剂阻断Notch1信号通路对人结肠癌耐药细胞化疗敏感性的影响[J].中国生物制品学杂志，2012，25（1）：23-28.
[11] 周敏，范志文，韩瑞超.γ分泌酶抑制剂阻断Notch信号通路对肺腺癌细胞A549增殖的影响[J].上海交通大学学报：医学版，2012，32（8）：1024-1028.
[12] Zanotti S，Canalis E. Notch and the Skeleton [J]. Mol Cell Biol，2010，30（4）：886-896.
[13] Hughes DP. How the NOTCH pathway contributes to the ability of osteosarcoma cells to metastasize [J]. Cancer Treat Res，2009，152：479-496.
[14] Kawakami T，Siar CH，Ng KH，et al. Expression of Notch in a case of osteosarcoma of the maxilla [J]. Eur J Med Res，2004，9（11）：533-535.
[15] Yu L，Fan Z，Fang S，et al. Cisplatin selects for stem-like cells in osteosarcoma by activating Notch signaling [J]. Oncotarget，2016，7（22）：33055-33068.
[16] Engin F，Bertin T，Ma O，et al. Notch signaling contributes to the pathogenesis of human osteosarcomas [J]. Human Mol Genet，2009，18（8）：1464-1470.
[17] 游浩，张觅，刘洋，等.阻断Notch信号通路抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖的实验研究[J].华中科技大学学报：医学版，2014，43（5）：541-545.
[18] Tanaka M，Setoguchi T，Hirotsu M，et al. Inhibition of Notch pathway prevents osteosarcoma growth by cell cycle regulation [J]. Br J Cancer，2009，100（12）：1957-1965.
[19] 许自力，邓展生，许宇霞.Notch1、Dll4蛋白在骨肉瘤的表达及临床意义[J].中国骨肿瘤骨病，2009，8（1）：28-31.
[20] Li R，Zhang W，Cui J，et al. Targeting BMP9-promoted human osteosarcoma growth by inactivation of notch signaling [J]. Curr Cancer Drug Targets，2014，14（3）：274-285.